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Test D’Ouchterlony

dimanche 23 novembre 2014 [ télécharger l'article au format PDF]

Principe de la méthode d’Ouchterlony

C’est l’immunodiffusion sur gel : les solutions déposées dans les puits creusés dans le gel diffusent de façon homogène dans toutes les directions autour du puits. Deux auréoles de diffusion peuvent donc entrer en contact lorsqu’elles ont suffisamment progressé. Cette zone de contact reste invisible s’il n’y a pas de réaction entre les deux solutions. En revanche, elle se traduit par un arc de précipitation visible à l’œil nu lorsque les deux solutions réagissent. Le temps de réaction est de l’ordre de 20 min.

Protocole

1- Creuser les puits nécessaires dans la gélose de la boîte de Petri Au fond de la boîte de Petri est coulé un gel d’agar. Utiliser le gabarit ci-dessous (ou celui fourni), pour répartir les puits nécessaires. S’exercer avec la boîte d’apprentissage pour creuser les puits avec l’emporte-pièce. Utiliser le cure-dent pour éliminer les cylindres de gélose si nécessaire.

2. Choisir et marquer sur la boîte de Petri la disposition des produits à déposer dans les puits permettant de révéler la réaction de l’anticorps (T) étudié avec les différents antigènes proposés (1 à 5).

3. Remplir les puits

Le produit prélevé dans un tube avec un compte-goutte propre ou avec une micropipette (régler la à 20 µl) doit être déposé dans le puits approprié sans débordement ni bulles et sans endommager le gel d’agar. S’exercer avec la boîte d’apprentissage et de l’eau distillée.

4. Observer les résultats fournis sur fond noir et en éclairage rasant, au bout d’environ 20 minutes


Gestes techniques :

Creuser les puits dans la gélose, en vidéo (88sec)

Flash Video - 3 Mo
creuser des puits

Utiliser une micropipette :

Flash Video - 6.9 Mo
Utiliser une micropipette

Couler un gel :

Flash Video - 1.6 Mo
couler un gel

*source :

* Une animation pour comprendre le principe (suivre ce lien)
* voir un exemple de résultat, sur académie de Lyon.
* Banque de Vidéo, académie de Versailles.


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